Адельман Д., под ред. - Иммунология

4. Исследование молекул адгезии. Обычно определяют экспрессию поверхностных антигенов CD11a/CD18, CD11b/CD18 и CD11c/CD18 с помощью проточной цитофлюориметрии и моноклональных антител к CD11a, CD11b, CD11c и CD18. При иммунодефицитах, обусловленных нарушением адгезии лейкоцитов, наблюдается снижение экспрессии этих антигенов как на покоящихся, так и на активированных нейтрофилах. К лабораторным признакам этих иммунодефицитов относятся нейтрофильный лейкоцитоз, снижение хемотаксической и фагоцитарной активности нейтрофилов и снижение скорости миграции нейтрофилов в очаг воспаления. Иммунодефициты, обусловленные нарушением адгезии лейкоцитов, проявляются рецидивирующими инфекциями, медленным заживлением ран и отсутствием гноя в очагах инфекции.

V. Комплемент

Комплемент— это группа сывороточных белков, состоящая из протеаз и их активаторов. Существуют два механизма активации комплемента— классический и альтернативный (см. гл.1,п.IV.Г). Комплемент играет важную роль в защите от микробов, активирует катаболизм циркулирующих иммунных комплексов и участвует в регуляции функций иммунной системы.

А. Определение гемолитической активности комплемента. Для исследования компонентов классического пути активации комплемента определяют его гемолитическую активность. Суть метода заключается в следующем: 1)разные разведения сыворотки больного и нормальной сыворотки добавляют к эритроцитам барана, покрытым антителами; 2)степень гемолиза оценивают фотометрически по выходу гемоглобина в раствор. За единицу гемолитической активности комплемента принимают величину, обратную тому разведению сыворотки, при котором разрушаются 50% эритроцитов. Существуют модификации метода, основанные на применении небольших объемов исследуемой сыворотки. Определение гемолитической активности комплемента по 100% гемолизу основано на гемолизе в геле. Суть этого метода заключается в следующем: 1)в геле, содержащем покрытые антителами эритроциты барана, делают лунки; 2)в лунки вносят разные разведения исследуемой и нормальной сывороток; 3)гемолитическую активность комплемента оценивают по диаметру зон гемолиза. Активность комплемента зависит от целого ряда факторов, поэтому нарушение правил забора и хранения сыворотки обычно приводит к ошибочным результатам исследования. Определение гемолитической активности комплемента позволяет обнаружить недостаточность компонентов комплемента, прежде всего участвующих в образовании мембраноатакующего комплекса. Кроме того, оценка этого показателя может использоваться для выявления активации комплемента, например при СКВ и гломерулонефрите, хотя чувствительность метода для этого недостаточно высока. Оптимальный метод выявления активации комплемента заключается в определении продуктов расщепления его компонентов. В настоящее время этот метод находится на стадии разработки. Альтернативный путь активации комплемента исследуют редко.

Б. Определение компонентов комплемента обычно проводят при обследовании больных с аутоиммунными заболеваниями и при подозрении на генетический дефект комплемента.

1. Количественное определение компонентов комплемента в большинстве лабораторий проводят с помощью простой радиальной иммунодиффузии и нефелометрии. Однако если функциональный дефект компонентов комплемента не сопровождается изменением их антигенных свойств, эти методы неинформативны. Так, у 15% больных с наследственным отеком Квинке количественные методы исследования выявляют нормальный уровень ингибитора C1-эстеразы, в то время как его активность снижена.

2. Функциональные исследования позволяют оценить активность отдельных компонентов комплемента в сыворотке. Оценку активности компонентов комплемента проводят следующим образом: 1)к стандартной сыворотке, лишенной какого-либо компонента комплемента, добавляют исследуемую сыворотку (источник недостающего компонента комплемента); 2)определяют гемолитическую активность комплемента по методу, описанному в гл.20,п.V.А. Если гемолитическая активность комплемента не восстанавливается до нормы, значит, активность этого компонента комплемента в исследуемой сыворотке снижена. Иногда дополнительно оценивают активность регуляторных компонентов комплемента, например ингибитора C1-эстеразы (см. гл.20,п.V.Б.1). Исследование активности компонентов комплемента проводится только в специализированных лабораториях.

VI. Определение циркулирующих иммунных комплексов

А. Методы, основанные на выявлении C3 и продуктов его расщепления, связанных с иммунными комплексами.

1. На клетках линии Raji находятся рецепторы к C3. При добавлении исследуемой пробы к клеткам Raji иммунные комплексы, связанные с этим компонентом комплемента, фиксируются на поверхности клеток. Связанные с клетками иммунные комплексы выявляются с помощью меченых антител к иммуноглобулинам.

2. Иммунные комплексы, связанные с C3, можно также выявить с помощью меченых антител к C3 или бычьего конглютинина (конглютинины— белки сыворотки крупного рогатого скота и лошадей, вызывающие гемагглютинацию в присутствии антител и комплемента).

Б. Другая группа методов основана на связывании иммунных комплексов с меченым или фиксированным на твердой подложке C1q.

Для получения надежных результатов рекомендуется одновременно использовать несколько методов определения иммунных комплексов. Поскольку результаты определения циркулирующих иммунных комплексов часто бывают противоречивы и малоинформативны, это исследование проводится редко.

VII. Определение IGe

А. Определение общего уровня IgE обычно проводят с помощью РИА (см. гл.20,п.I.Д), поскольку низкое содержание этого иммуноглобулина не позволяет использовать те методы, которые применяются для определения IgG, IgA и IgM (см. приложениеV). Количественную оценку IgE проводят следующим образом: 1)исследуемую пробу добавляют к сорбированным на твердой подложке антителам против IgE; 2)после отмывания от несвязанного IgE добавляют меченные изотопом антитела к IgE; 3)после отмывания от несвязанных меченых антител по уровню радиоактивности определяют количество IgE в исследуемой пробе (см. гл.20,п.I.Д). Оценку результатов проводят с учетом возраста (см. приложениеIV). По рекомендации ВОЗ для стандартизации методов определения общего уровня IgE используется стандартизированный IgE. Для постановки диагноза аллергического заболевания определение общего уровня IgE не применяют, поскольку у больных и здоровых этот показатель часто бывает одинаковым. Тем не менее показано, что у грудных детей с высоким уровнем IgE риск аллергии повышен, а у взрослых с низким уровнем IgE (менее 50нг/мл) аллергические заболевания маловероятны. Значительное повышение уровня IgE характерно для аллергического бронхолегочного аспергиллеза. Для оценки эффективности лечения этого заболевания проводят серийное определение общего уровня IgE в сыворотке. Повышение содержания IgE в сыворотке наблюдается также при синдроме гиперпродукции IgE и синдроме Вискотта—Олдрича (см. гл.18,п.III.В).

Б. Определение специфических IgE обычно проводят с помощью кожных проб. Определение специфических IgE с помощью РАСТ показано при высоком риске анафилактических реакций, поражении кожи и проведении лечения, влияющего на результаты кожных проб (см. гл.2,п.II.В.3). Суть метода заключается в следующем: 1)к аллергену, сорбированному на твердой подложке, добавляют исследуемую сыворотку; 2)после отмывания несвязавшихся IgE добавляют меченые антитела к IgE; 3)по уровню радиоактивности оценивают содержание специфических IgE в исследуемой пробе. Применяется модификация метода с использованием меченных ферментом антител к IgE.

В. Методы, основанные на реакции высвобождения гистамина тучными клетками. Суть методов заключается в следующем: 1)к тучным клеткам, покрытым специфическими IgE, добавляют антиген; 2)связывание антигена с IgE вызывает дегрануляцию тучных клеток и высвобождение гистамина; 3)определяют содержание гистамина в растворе. Эти методы могут использоваться для изучения влияния лекарственных средств и других веществ на тучные клетки и базофилы при аллергических заболеваниях. Методы, основанные на реакции высвобождения гистамина тучными клетками, трудоемки и применяются редко.

Глава 21.Иммунопрофилактика

Х.Кесарвала.

В результате контакта с микробами во время инфекции развивается временный или постоянный иммунитет к ним. Иммунопрофилактика позволяет выработать иммунитет до естественного контакта с возбудителем. Благодаря созданию вакцин стала возможной профилактика многих инфекционных болезней и ликвидация такого тяжелого заболевания, как натуральная оспа.

I. Активная и пассивная иммунизация

А. Активная иммунизация— введение антигена для стимуляции иммунного ответа и развития иммунитета. Повторная иммунизация способствует более выраженному иммунному ответу и повышению устойчивости к возбудителю. При инфекциях с длительным инкубационным периодом, например при бешенстве, активная иммунизация позволяет предупредить заболевание даже после заражения. В зависимости от типа антигена активная иммунизация приводит к формированию временного или постоянного иммунитета.

Б. Пассивная иммунизация— введение антител к каким-либо антигенам. С помощью пассивной иммунизации можно создать только временный иммунитет продолжительностью 1—6нед. Хотя пассивная иммунизация вызывает кратковременное повышение устойчивости к возбудителю, ее действие проявляется немедленно. Повторная пассивная иммунизация не усиливает иммунитет и часто сопровождается осложнениями. Ее обычно проводят после контакта с возбудителем и при невозможности активной иммунизации.

II. Виды вакцин

А. Бактериальные вакцины могут быть живыми и инактивированными. Для приготовления живых вакцин используются штаммы со сниженной вирулентностью и сохраненными антигенными и иммуногенными свойствами. Патогенность некоторых бактерий определяется их способностью вырабатывать токсины. Для стимуляции выработки токсиннейтрализующих антител применяют анатоксины— инактивированные токсины с сохраненными антигенными и иммуногенными свойствами.

Б. Вирусные вакцины также могут быть живыми и инактивированными. Живые вирусные вакцины вызывают более длительный иммунитет, чем инактивированные. Для поддержания иммунитета с помощью инактивированных вакцин требуется более частая ревакцинация. Живые вирусные, как и живые бактериальные, вакцины изготавливаются из штаммов со сниженной вирулентностью, но сохраненными антигенными и иммуногенными свойствами.

III. Комбинированное применение вакцин.

Существует предположение, что при одновременном применении нескольких вакцин иммунный ответ на них может меняться. Так, при одновременном применении вакцины против желтой лихорадки и вакцины против холеры или противокоревой вакцины иммунный ответ на одну или обе вакцины снижается. При одновременном применении вакцин, вызывающих местные или системные реакции, их побочное действие может усиливаться, установить причину побочных реакций при этом обычно не удается. В связи с этим комбинации вакцин назначают только в том случае, когда их эффективность и безопасность точно установлены, а живые вирусные вакцины назначают с интервалом не менее 1мес. Разрешено применение следующих комбинаций вакцин: против дифтерии, коклюша и столбняка (АКДС, АДС, АДС для взрослых), против кори, эпидемического паротита и краснухи, живой полиомиелитной вакцины с АКДС, вакцины против кори, эпидемического паротита и краснухи с третьей или четвертой дозой живой полиомиелитной вакцины и АКДС, а также вакцины против Haemophilus influenzae типаB в сочетании с любыми перечисленными вакцинами. Существует комбинированная вакцина, в состав которой входят АКДС и вакцина против Haemophilus influenzae типаB. Ее назначают детям грудного и младшего возраста, у детей старше 7лет ее не применяют. При необходимости одновременно назначают все вакцины, необходимые ребенку данного возраста.

IV. Введение вакцин

А. Применяют одноразовые шприцы и иглы. Для п/к и внутрикожных инъекций используют иглы 25G длиной 16мм, для в/м— 22G длиной 32мм.

Б. Для п/к инъекций лучше всего использовать разгибательную или наружную поверхность плеча, для внутрикожных— внутреннюю поверхность предплечья, для в/м— переднебоковую поверхность верхней части бедра или (у подростков и взрослых) дельтовидную область. При одновременном применении нескольких вакцин их вводят в разные участки. В настоящее время не рекомендуется вводить вакцины в верхненаружный квадрант ягодицы. Инъекции в эту область производят лишь в том случае, когда необходимо ввести большой объем препарата, например нормального иммуноглобулина.

В. После введения иглы слегка потягивают за поршень шприца. Если в шприце появляется кровь, иглу вводят в другой участок.

Г. Для каждой инъекции применяют отдельные одноразовые иглу и шприц. Использованные иглы и шприцы выбрасывают в специальный контейнер.

V. Хранение вакцин.

При неправильном хранении вакцины теряют активность. Условия хранения и использования приведены в инструкции изготовителя, прилагаемой к каждой вакцине. Ниже приведены правила хранения часто употребляемых вакцин.

А. Температура хранения вакцин не должна превышать 2—8°C (если в инструкции не указана другая), при транспортировке— 10°C. Замораживать вакцины нельзя.

Б. Живую полиомиелитную вакцину хранят в морозильной камере. Вакцину можно замораживать и оттаивать не более 10раз. Температура при оттаивании не должна превышать 8°C, общее время оттаивания— 24ч. Если замораживать вакцину больше нельзя, а срок хранения не истек, ее можно хранить в течение 30сут при температуре не выше 8°C.

В. Вакцину против кори, эпидемического паротита и краснухи следует хранить в темном месте. Для разведения применяют растворитель, поставляемый производителем. Этот растворитель не содержит консервантов и веществ, которые могут инактивировать живые вирусы. Вакцину используют сразу после разведения.

VI. Осложнения вакцинации.

Чаще всего это местные реакции (уплотнение и боль в месте инъекции), изредка они бывают выраженными. При выраженной местной реакции, особенно при повторном введении столбнячного анатоксина или инактивированной брюшнотифозной вакцины, ревакцинация соответствующими вакцинами противопоказана. Системные реакции проявляются лихорадкой, артралгией, артритом, сыпью и артериальной гипотонией. Чаще всего наблюдается незначительная лихорадка, которую лечат жаропонижающими средствами. Аллергические реакции могут быть вызваны самой вакциной, а также яичным белком, антимикробными средствами или консервантами, входящими в ее состав.

Последнее время подвергается сомнению целесообразность применения инактивированной вакцины против коклюша. Однако по нашему мнению, при правильном использовании эта вакцина достаточно эффективна. Связь между вакцинацией против коклюша и неврологическими расстройствами не доказана. По данным Американской академии педиатрии (Report of the Committe on Infectious Diseases, Elk Grove Village, IL: American Academy of Pediatrics, 1994. Pp.361—367), абсолютными противопоказаниями к ревакцинации АКДС служат: 1)аллергическая реакция после предыдущей вакцинации; 2)энцефалопатия, развившаяся в течение 7сут после предыдущей вакцинации (нарушения сознания и очаговая неврологическая симптоматика). Ранее к абсолютным противопоказаниям также относили 1)не объяснимое другими причинами повышение температуры более 40,5°C в течение 48ч после вакцинации; 2)резкую артериальную гипотонию в течение 48ч после вакцинации; 3)громкий плач на протяжении 3ч или необычный, пронзительный крик в течение 48ч после вакцинации; 4)эпилептические припадки в течение 3сут после вакцинации. При развитии эпилептических припадков в течение 4—7сут после вакцинации, перед ревакцинацией показано неврологическое исследование. Поскольку все перечисленные осложнения не вызывают стойких нарушений, в настоящее время их рассматривают как относительные противопоказания к ревакцинации. Широко применявшаяся ранее инактивированная вакцина против коклюша состоит из целых клеток возбудителя. В настоящее время выпускается и субъединичная вакцина. Она иммуногенна, но вызывает меньше побочных эффектов, чем инактивированная. Поскольку эффективность субъединичной вакцины у грудных детей сомнительна, ее применяют только для ревакцинации детей старше 1,5года. Существует комбинированная вакцина, состоящая из дифтерийного и столбнячного анатоксинов и субъединичной вакцины против коклюша. Противопоказания к применению субъединичной вакцины против коклюша такие же, как к применению инактивированной.

VII. Противопоказания и меры предосторожности.

Поскольку любая вакцина обладает побочными действиями, вакцинацию проводят только в том случае, когда ожидаемая польза значительно превосходит риск осложнений. Противопоказаниями к вакцинации служат следующие состояния.

А. Высокая лихорадка. Инфекция верхних дыхательных путей без лихорадки не служит противопоказанием к вакцинации.

Б. Иммунодефициты. В этом случае противопоказаны живые вакцины. Их можно применять лишь после нормализации иммунитета. Инактивированные вакцины и анатоксины использовать можно.

В. Во время лечения кортикостероидами, антиметаболитами, цитостатиками, антилимфоцитарным иммуноглобулином и при проведении лучевой терапии противопоказаны живые вакцины.

Г. Беременность, гемобластозы. Противопоказаны живые вакцины.

Д. После применения нормальных иммуноглобулинов и переливания плазмы или цельной крови вакцинация противопоказана в течение 8нед.

Е. Одновременное применение нескольких вакцин противопоказано, если не подтверждены его эффективность и безопасность.

Ж. Аллергическая реакция на данную вакцину в анамнезе. При этом также противопоказаны сходные с ней вакцины. Больным с аллергией к яйцам, куриному и утиному мясу противопоказаны вакцины, приготовленные из вирусов, выращенных на эмбрионах кур и уток: противогриппозная вакцина и вакцина против желтой лихорадки. Вакцины, приготовленные из вирусов, выращенных в культуре куриных или утиных фибробластов, например противокоревая вакцина, обычно не содержат антигенов яйца, хотя при введении больным с аллергией к яйцам иногда все же вызывают аллергические реакции. При выраженной аллергии к яйцам перед вакцинацией ставят кожную пробу с вакциной и при необходимости проводят десенсибилизацию (J.J.Herman, R.Radin, R.Schneiderman. Allergic reactions to measles (rubeola) vaccine in patients hypersensitive to egg protein. J.Pediatr. 102:196, 1983). При подозрении на аллергию к белкам, используемым при изготовлении вакцины, подбирают вакцину, изготовленную по другой технологии, или проводят следующие мероприятия.

1. Ставят скарификационную пробу с вакциной, разведенной физиологическим раствором в соотношении 1:10. Реакцию оценивают через 20мин (см. гл.2,п.II.В.4).

2. При отрицательной реакции проводят внутрикожную пробу с вакциной, разведенной физиологическим раствором в соотношении 1:100. Вводят 0,02мл полученного раствора.

3. Если реакция отрицательна, проводят вакцинацию. После введения вакцины за больным наблюдают в течение 30мин. Профилактика и лечение анафилактических реакций описаны в гл.11,пп.V—VI.

З. Юридические аспекты иммунопрофилактики. В США принят закон о порядке возмещения ущерба, нанесенного иммунопрофилактикой. Принятие этого закона привело к снижению числа судебных исков против изготовителей и поставщиков вакцин. Согласно этому закону, родители должны подписать документ, в котором указаны отрицательные и положительные последствия вакцинации, а также номер партии, фирма-производитель и дата введения вакцины или иммуноглобулина.

VIII. Иммунопрофилактика во время беременности

А. Беременным противопоказаны живые вирусные вакцины, например противокоревая, а также против краснухи, полиомиелита, эпидемического паротита, желтой лихорадки. В редких случаях, когда контакт с возбудителем неизбежен (например, при поездке в район его распространения), можно ввести вакцину против желтой лихорадки.