Прозоркина H. В., Рубашкина П. А. - Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии

Поражения, вызванные стрептококками этой группы, можно наблюдать как у взрослых, так и у детей.

Пневмококки — Streptococcus pneumoniae

Пневмококки были описаны Пастером в 1871 г. Это пар-норасположенные кокки, овальной формы. В организме человека и животных образует капсулу. Неподвижны, спор не образуют, факультативные анаэробы, грамположительные. Хорошо растут на средах с добавлением крови.

Вирулентность стрептококков связана с веществом капсулы. По капсульному антигену пневмококки делятся на 85 сероваров. Большинство сероваров пневмококков — это нормальные обитатели верхних дыхательных путей. При ослаблении защитных сил организма они способны вызывать пневмонию.

Эпидемиология. Ежегодно по всему миру регистрируются около 500 тыс. случаев пневмококковых пневмоний. Наиболее часто это заболевание встречается у детей и лиц преклонного возраста. Основным источником инфекции являются больные и бактерионосители. Основной путь передачи — контактный, а в период вспышек — воздушно-капельный. Пик заболеваемости приходится на холодное время года

(при переохлаждении организма снижаются его защитные силы).

Клинические проявления пневмонии. При крупозной пневмонии поражаются доли или все легкое. Заболевание начинается внезапно: повышается температура; озноб; сухой кашель и боли в грудной области. У пожилых людей, наоборот, заболевание развивается медленно, с нарушением сознания и признаками легочно-сердечной недостаточности.

После перенесенного заболевания у человека вырабатывается непродолжительный иммунитет.

Специфическая профилактика пневмонии отсутствует. Личная профилактика сводится к закаливанию организма.

Зеленящие стрептококки

Стрептококки этой группы чаще всего выделяют из полости рта и кишечника человека. Обитая в полости рта, микробы расщепляют углеводы или азотистые вещества пищи с образованием кислоты и щелочи. Избыточное накопление кислот способствует растворению зубной эмали, что приводит в результате к кариесу зубов. Наибольшую группу стрептококков, находящихся во рту, составляют S. mitis — они локализуются в щелях между десной и поверхностью зуба, что вызывает воспаление зубной пульпы, а при стоматологических манипуляциях (удаление зуба) может вызвать по-дострый эндокардит и другие осложнения.

Str. salivarius обитает в слюне и на спинке языка, вызывает кариес поверхности корня. Str. sanguis также вызывает кариес зубов.

Бактериальные эндокардиты развиваются при проникновении зеленящих стрептококков в кровоток. Такие эндокардиты сопровождаются поражением сердечных клапанов. Поражения сопровождаются лихорадкой, потерей массы тела, потливостью и другими симптомами.

Лечение таких заболеваний не отличается от терапии, проводимой при других стрептококковых инфекциях.

Основные поражения человека, вызываемые стрептококками

Поражение

Возбудитель

Материал для исследования

Менингиты

Стрептококки групп А, В S. pneumoniae

Ликвор

Поражения кожи и мягких тканей

Стрептококки групп А, С, зеленящие стрептококки; S. pyogenes

Мазки из очагов поражений, гнойное отделяемое

Фарингиты

Стрептококки групп А и С, G

Мазки из зева

Неонатальный сепсис

Стрептококки группы В иО

Инфекции мочеполовой системы

Стрептококки группы В; аэрококки

Пневмонии

Стрептококки групп А и В; S. pneumoniae

Мокрота, кровь, плевральная жидкость

Отиты среднего уха

S. pneumoniae

Тимпаноцентез

Эндокардиты

Стрептококки В, С, G, D; S. pneumoniae; зеленящие стрептококки

Абсцессы легких, печени, головного мозга

Зеленящие стрептококки

Аспираты из очагов поражения

Кариес зубов, периодонтит

Зеленящие стрептококки; S. mitis, S. salivarius

Слюна, кариозная полость

Иммунитет после перенесения стрептококковых инфекций имеет нестойкий характер. Исключение составляет скарлатина. Также в литературе встречаются данные о том, что после перенесения стрептококковых инфекций у человека наступает аллергизация организма.

§ 3. Род neISserla

Основными представителями этого рода являются возбудители менингококковой инфекции и гонореи. В этот род включены также непатогенные представители, встречающиеся в полости рта, носоглотки, верхних дыхательных путей. Как правило, это парнорасположенные кокки, но могут образовывать и скопления.

Все нейсерии грамотрицательные. Спор не образуют, жгутиков не имеют. Аэробы, могут быть и факультативными анаэробами. В организме человека образуют капсулу, имеют пили или микроворсинки, способствующие адгезии патогенных бактерий к эпителию. Каждый вид этого рода избирательно ферментирует углеводы.

Neisseria meningitidis — возбудитель менингококковой инфекции. Впервые этот вид бактерий был открыт Вексельба-умом в 1887 г., хотя упоминания об эпидемиях менингита встречаются в трудах древнегреческих врачей.

Морфологические и культуральные свойства. Менингококки — мелкие диплококки (0,7—0,8 мкм), в мазках напоминают кофейные зерна. Неподвижны, спор не образуют, грамотрицател ьны.

Менингококки хорошо растут на питательных средах с добавлением крови, молока или яичного желтка. В качестве источника углерода и азота менингококки используют аминокислоты — аспарагин, глутамин, глицин, поэтому их включают в среду культивирования. Элективная среда должна содержать ристомицин. Повышенная концентрация углерода стимулирует рост менингококков.

Резистентность. Во внешней среде менингококк нестоек, быстро погибает при отклонении температуры от 37°С. При температуре 55°С менингококк погибает через 3—5 мин. Плохо переносит охлаждение. При низкой температуре теряет способность к образованию колоний. Бактерии также чувствительны к ультрафиолетовому облучению, к дезинфицирующим средствам. В 1 % растворе карболовой кислоты гибнет в течение 1 мин. Такое же действие оказывают 1 % раствор хлорамина, 70° спирт. Менингококки чувствительны к антибиотикам тетрациклинового ряда, эритромицину и др.

Эпидемиология. Основной источник менингококковой инфекции — больной человек или бактерионоситель. Возбудитель передается воздушно-капельным путем. Входными воротами бактерий является носоглотка, где возбудитель может длительно существовать, не вызывая заболевания (носительство). Менингококки встречаются на слизистых оболочках носоглотки у 5—10% здорового населения. Для ме-нингококковой инфекции характерна цикличность заболеваемости. Отмечены подъемы заболеваемости каждые 10—12 лет. Наиболее восприимчивы к этой инфекции дети до трех лет, а возраст носителей менингококка превышает 20 лет.

Патогенез поражений. Основным фактором патогенно-сти является капсула, которая защищает менингококки от клеток фагоцитов. Со слизистой носоглотки возбудитель распространяется дальше по лимфатическим и кровеносным сосудам. Поэтому основной путь распространения менингококка по организму — гематогенный. Менингококковая бактериемия сопровождается массовой гибелью возбудителей и выделением эндотоксина (менингококкцемия). Как правило, менингит развивается на фоне вирусных инфекций (грипп, ОРВИ), а также при снижении защитных сил организма. По кровеносным сосудам возбудитель проникает в оболочки спинного и головного мозга и вызывает в них гнойное воспаление — менингит.

Клинические проявления. Инкубационный период менингита — 2—7 дней. Менингит начинается остро. Отмечаются высокая температура, рвота, судороги, очень сильная головная боль, при которой даже больно моргнуть или просто повернуть голову. Заболевание длится несколько недель. Иногда развивается менингококковый сепсис.

После перенесенного заболевания у человека вырабатывается очень стойкий, длительный иммунитет.

Неспецифическая профилактика этого заболевания сводится к соблюдению санитарно-противоэпидемического режима в местах большого скопления людей.

Neisseria gonorrhoeae — является возбудителем венерического заболевания — гонореи.

Морфологические и культуральные свойства. Гонококк был открыт в 1879 г. Нейссером. Это парнорасположенные кокки, напоминают кофейное зерно, неподвижны, образуют капсулу. Для гонококков характерен полиморфизм: встречаются мелкие и крупные клетки, а также палочковидные формы. Хорошо красятся всеми анилиновыми красителями, грам~, но могут встречаться и грам+. Аэробы. Opt. pH 7,2— 7,4, требователен к питательным средам. Для культивирования применяют сывороточный, асцитический и кровяной агары. На кровяном агаре гемолиза не дают. Гонококки разлагают глюкозу с образованием кислоты и декстрозу.

На плотных средах гонококки образуют мелкие колонии. На жидких средах растут диффузно с образованием пленки на поверхности.

Резистентность. Гонококки малоустойчивы во внешней среде. При 40°С погибают через 3—6 часов, при 56°С — в течение 5 минут. Не переносят охлаждения. Поэтому посев следует проводить сразу после забора материала от больного. Высокочувствителен к пенициллину. В процессе лечения быстро приобретает устойчивость к антибиотикам различных групп.

Эпидемиология. Гонореей болеет только человек. Животные невосприимчивы к этой инфекции, в отличие от человека. Единственный источник инфекции — больной человек. Основной путь передачи — половой, возможно инфицирование плода при прохождении через родовые пути матери. Таким путем гонококки могут попасть в конъюнкти-вальный мешок глаза новорожденного и вызвать там воспаление (бленнорея). Возможно также заражение гонококком через кровь, взятой у инфицированных лиц на раннем этапе заболевания (что случается крайне редко).

У человека гонококк колонизируется на эпителии мочеиспускательного канала, прямой кишки, конъюнктивы, шейки матки, маточной трубы и яичника. Гонококковая инфекция часто проявляется воспалением тазовых органов и бесплодием у женщин.

Патогенез поражений. Гонококк попадает на слизистые мочеполовых путей, там усиленно размножается и проникает в подслизистую соединительную ткань. Хотя надо отметить, что попадание гонококков в организм не всегда приводит к развитию заболевания. В этом случае большое значение имеет вирулентность возбудителя, инфекционная доза, место проникновения и состояние иммунного статуса организма. Гонококки фагоцитируются лейкоцитами, размножаются в них и не перевариваются (незавершенный фагоцитоз).

Клинические проявления. Инкубационный период гонореи — 2—3 дня. Гонорея проявляется болями при мочеиспускании, выделением гноя из уретры. Чаще всего у женщин заболевание протекает бессимптомно, что делает женщин основными носителями инфекции. У мужчин бессимптомное течение гонореи практически не наблюдается.

При бленнорее новорожденных возникает гнойное воспаление глаз.

После перенесенного заболевания у человека остается непродолжительный, кратковременный иммунитет.

Профилактика гонореи сводится к санитарно-просвети-тельной работе среди населения и своевременному выявлению больных. Специфическая профилактика не проводится.

ВОПРОСЫ для САМОКОНТРОЛЯ

1. Какие вы знаете заболевания, вызываемые стрептококками ?

2. Как делятся стрептококки по гемолитической активности?

3. Назовите основные морфологические и кулътуралъные свойства стафилококков.

4. Какие токсины образуют стафилококки?

5. Что вы знаете о пневмонии ?

6. Какой иммунитет остается после перенесения пневмококковой инфекции?

7. Дайте общую характеристику нейсерий.

8. Назовите клинические проявления менингита.

9. Назовите возбудителя, вызывающего гонорею.

10. Какой иммунитет остается после перенесения гонореи?

§ 4. Практическая часть

Техника сбора материала от больного для бактериологического исследования

Выбор материала для лабораторного исследования определяется локализацией патологического процесса, особенностями патогенеза болезни и биологическими свойствами возбудителя.

Успех бактериологического исследования зависит от правильности забора материала. Патологический материал для бактериологического исследования рекомендуется брать у больного до начала специфического лечения, так как под влиянием сульфаниламидов, антибиотиков, иммунной сыворотки и других лечебных средств патогенные микробы изменяются и утрачивают способность к росту на искусственных питательных средах.

Взятие слизистого отделяемого полости носа

При взятии материала со слизистых оболочек носа, кожу в окружности наружных отверстий носа протирают ватой, смоченной 60° спиртом. После этого тампон вводят вглубь полости носа и снимают слизь со стенки носовой перегородки. Забирать материал из разных ноздрей можно одним тампоном.

Взятие слизи тампоном со слизистых оболочек зева

Больной должен широко открыть рот. Корень языка придавливают шпателем. Язык стараются придавить книзу и придвинуть кпереди. Тампон в полость рта вводят правой рукой, не касаясь поверхности языка, содержащего обильную микрофлору. Снимая налет и слизь с миндалин, дужек мягкого нёба и задней стенки глотки, обращают внимание на видимые измененные участки слизистой оболочки.

Взятие мокроты для микробиологического исследования

Для бактериологического исследования утреннюю порцию мокроты, выделяющуюся во время приступа кашля, собирают в стерильную склянку с хорошо подобранной пробкой. У детей, которые не умеют откашливать мокроту, искусственно вызывают кашель, раздражая корень языка тампоном.

Взятие испражнений для бактериологического исследования

Испражнения собирают в стерильные картонные тарелки или в подкладные судна и эмалированные лотки, предварительно обеззараженные раствором хлорной извести и затем многократно промытые горячей водой.

Стерильным деревянным шпателем из разных мест полученной порции кала отбирают 1—2 г испражнений, помещают их в пробирки или склянки с хорошо закрывающимися пробками. При наличии патологических включений (слизь, гной) последние обязательно вносят в посевной материал.

Патогенные кокки: стафилококки, стрептококки

Стафилококки

Материал для исследования:

1) гной из очагов поражения при гнойничковых заболеваниях кожи, фурункулах и т. д.;

2) кровь при подозрении на сепсис;

3) слизистое отделяемое зева и носоглотки при заболеваниях верхних дыхательных путей;

4) мокрота при пневмонии;

5) рвотные массы и промывные воды желудка.

Микробиологическая диагностика стафилококка

В лаборатории для диагностики стафилококковых заболеваний используют бактериологический метод исследования — посев патологического материала на питательные среды.

1-й день. 1. При исследовании гноя открытых ран, мокроты лучше всего пользоваться желточно-солевым агаром Чистовича или молочно-солевым агаром. Для засева солевых сред берется большое количество материала, который втирают в поверхность среды шпателем.

2. При посеве гноя из невскрывшихся абсцессов можно пользоваться обычным мясопептонным или 3% кровяным агаром. Исследуемый материал наносят на питательную среду в количестве 1—2 капель и затем распределяют по всей поверхности чашки. Инкубация посевов при температуре 37°С длится 18—24 часа.

2-й день. Просматривают посевы исследуемого материала на МП А, мол очно-солевом, желточно-солевом и кровяном агаре. Колонии стафилококка на плотных питательных средах круглые, слегка выпуклые, с ровными краями. По цвету колонии могут быть эмалево-белыми, лимонно-жел-тыми или золотистыми. На кровяном агаре вокруг колоний стафилококка может обнаруживаться гемолиз.

Из колонии с типичными для стафилококка признаками делают мазок для окраски по Граму. При наличии стафилококков под микроскопом видны характерные гроздевидные скопления кокков, окрашенных по Граму положительно.

3-й день. Просматривают посевы, сделанные накануне. По характеру роста на кровяном агаре стафилококки могут быть разделены на три группы. Гемолитически активные стафилококки образуют в течение 18—20 часов четкую зону гемолиза (агар становится совершенно прозрачным, бесцветным) шириной 2—3 мм. Слабо гемолитические стафилококки вызывают неполное просветление агара с шириной зоны 1—1,5 мм. Негемолитические стафилококки не изменяют кровяного агара.

4-й день. Из культур, выросших на скошенном мясопеп-тонном агаре, после предварительной проверки на чистоту, ставят реакцию плазмокоагуляции.

Техника постановки реакции плазмокоагуляции

В стерильную преципитационную пробирку наливают 0,2—0,3 мл плазмы, разведенной 1:3 — 1:5 стер, физраствором. Агаровую культуру стафилококка вносят в плазму петлей. Пробирки выдерживают при температуре 37°С в течение суток. Штаммы стафилококка, продуцирующие фермент плазмокоагулазу, вызывают свертывание плазмы, вследствие чего она превращается в желеобразную массу. Свертывание плазмы обозначается знаком плюс (+).

Стрептококки

По характеру роста на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: р-гемолитические стрептококки, а-зе-ленящие стрептококки иу-стрептококки (не вызывают гемолиза на кровяном агаре). Единственным методом дифференциации патогенных и непатогенных стрептококков является серологический метод Ленсфилд. Ленсфилд обнаружила в клеточной стенке стрептококка поверхностно расположенный группоспецифический полисахаридный антиген, который позволил разделить гемолитические и зеленящие стрептококки на 17 групп, обозначенных условно заглавными буквами латинского алфавита от А до S. Наиболее изученной является группа А, объединяющая большинство штаммов, патогенных для человека.

Патологическим материалом для исследования на стрептококки являются:

1) налет и слизь с миндалин и слизистых оболочек зева при ангине и скарлатине;

2) гной из очагов поражения;

3) кровь при явлениях септического характера.

Схема микробиологического исследования на стрептококки

1-й день: материал засевают в чашки Петри с 3%-м кровяным агаром. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37°С не более 20 часов.

2-й день: просматривают чашки. Штаммы стрептококков серологической группы А, наиболее патогенные для человека, могут образовывать колонии трех видов:

а) мукоидные — крупные, блестящие, вязкой консистенции; б) шероховатые — мелкие, плоские, с шероховатой поверхностью, зернистой структурой, изрезанным краем; в) гладкие — глянцевые, мелкие колонии серовато-зеленого цвета.

Из колоний с признаками, характерными для стрептококка, готовят мазки для окраски по Граму.

Колонии, окруженные зоной гемолиза, снимают петлей и пересевают в бульон Мартена.

3-й день: просматривают рост стрептококка в бульоне Мартена. В жидких питательных средах при характерном росте стрептококка бульон остается совершенно прозрачным, и только на дне и стенках пробирки образуется крошковид-ный осадок беловато-кремоватого цвета. Характер роста обусловлен длиной цепочек: чем длинней цепочки, тем лучше выражена зернистость.

Менингококки

Менингококк является возбудителем эпидемического цереброспинального менингита. Менингококки могут быть обнаружены и у здоровых людей — носителей менингококка.

При подозрении на менингит материалом для исследования служит спинномозговая жидкость (ликвор), получаемая при помощи пункции спинномозгового канала. Для микробиологического исследования требуется 5 мл ликвора.

При выявлении носителей менингококка исследуют отделяемое задней стенки носоглотки.

Исследование спинномозговой жидкости

1-й день: из ликвора, соблюдая правила стерильности, берут 1,5 мл жидкости. По внешнему виду ликвор может быть мутным или прозрачным, бесцветным или с примесью крови. Из мутного ликвора делают мазки и окрашивают их по Граму.

Ликвор засевают на питательные среды, содержащие и своем составе нативный белок. Посев производят тампонами методом отпечаток. Нанесенный таким образом материал распределяют по поверхности среды шпателем.